制備
HCG抗體常用的技術(shù)主要包括單克隆抗體制備技術(shù)和多克隆抗體制備技術(shù)，其中單克隆抗體制備技術(shù)更為常用且關(guān)鍵，其特點可從以下方面闡述：
一、單克隆抗體制備技術(shù)的特點
1.特異性強：單克隆抗體僅識別HCG的單一表位，尤其是β-HCG，與LH等類似激素的交叉反應(yīng)極低，優(yōu)質(zhì)單克隆抗體對β-HCG的特異性可超過99%，與LH的交叉反應(yīng)率低于0.1%，有效避免妊娠檢測中的假陽性問題。
2.均一性高：單克隆抗體由單一B細胞克隆產(chǎn)生，批次間差異小，確保實驗結(jié)果的重復(fù)性和穩(wěn)定性。
3.親和力強：單克隆抗體與HCG的結(jié)合力強，結(jié)合常數(shù)（KD）通常在10??至10?¹¹mol/L范圍內(nèi)，適用于低濃度HCG的檢測。
4.制備周期可控：雖然單克隆抗體制備周期較長（約2-3個月），但通過標(biāo)準(zhǔn)化流程可確保抗體質(zhì)量的穩(wěn)定性。
二、單克隆抗體制備流程的關(guān)鍵特點
1.免疫原選擇：以重組β-HCG或HCG全長為免疫原，通過CHO細胞表達確保正確折疊和糖基化修飾，使免疫原與天然HCG結(jié)構(gòu)一致，減少交叉反應(yīng)。
2.動物免疫：將重組β-HCG與佐劑混合后，通過腹腔注射免疫Balb/c小鼠（初次免疫+3次加強免疫），通過ELISA監(jiān)測血清抗體效價，當(dāng)效價超過1:10?時進行細胞融合。
3.細胞融合與篩選：取小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞（如SP2/0）融合，使用HAT培養(yǎng)基篩選雜交瘤細胞。通過ELISA篩選能結(jié)合HCG的陽性克隆，并排除與LH、FSH等激素發(fā)生交叉反應(yīng)的非特異性克隆。
4.克隆化與穩(wěn)定性驗證：采用有限稀釋法進行2-3輪克隆化培養(yǎng)，獲得穩(wěn)定分泌特異性抗體的單克隆細胞株。通過長期傳代培養(yǎng)驗證細胞株的穩(wěn)定性。
三、HCG抗體生產(chǎn)與純化的特點
1.體外培養(yǎng)規(guī)模化：雜交瘤細胞在無血清培養(yǎng)基中大規(guī)模培養(yǎng)，上清液經(jīng)Protein A親和層析純化，純度超過95%。
2.體內(nèi)制備輔助：通過小鼠腹腔注射雜交瘤細胞制備腹水，經(jīng)純化后獲得高純度抗體。
3.質(zhì)量驗證嚴格：最終抗體通過SDS-PAGE驗證純度，ELISA驗證活性，確保符合臨床和科研需求。
四、HCG抗體性能指標(biāo)的特點
1.靈敏度高：標(biāo)記后檢測下限可達0.1 mIU/mL，適用于早孕檢測（此時HCG水平較低）。
2.穩(wěn)定性強：抗體在-20℃條件下儲存可穩(wěn)定2年以上，4℃短期保存（1個月）活性無明顯下降。
更新時間：2025-09-24
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抗原抗體